T淋巴細胞亞群的檢測是細胞免疫檢測的最新指標之一。隨著抗T細胞單克隆抗體的問世及各種檢測方法的建立。 T淋巴細胞亞群檢測已經(jīng)在基礎醫(yī)學和臨床醫(yī)學研究中得到廣泛應用。
一、T淋巴細胞亞群及其功能：
T淋巴細胞及其分類主要應用抗T細胞表面抗原McAb.根據(jù)T淋巴細胞表面分化抗原將成熟T細胞分為CD4+、CD8-和CD4-、CD8+兩大亞群，T淋巴細胞的功能與表現(xiàn)型之間的對應關(guān)系是相對的，其免疫活性可能受激活“微環(huán)境”的影響，并受MHC抗原的制約，許多研究證明，CD4+T細胞具有殺傷活性，介導Ι類抗原不相容時的靶細胞溶解。TU等研究表明，CD4+的細胞毒活性存在兩種完全不同的機理，并證明TH1和TH2的細胞毒活性不同。前者強，后者弱或無活性。Dennert等發(fā)現(xiàn)，克隆化的T淋巴細胞具有輔助，細胞毒活性和遲發(fā)型超敏反應作用，這種功能的多樣性有賴于所采用的分析方法。CD4+細胞識別Ⅱ類MHC抗原，其效應的發(fā)揮也受Ⅱ類抗原的制約；CD8+細胞識別Ι類MHC抗原，發(fā)揮免疫效應也受其控制。
二、T細胞亞群的檢測方法：
人類T細胞亞群的檢測方法種類繁多，但大多都是根據(jù)T細胞表面抗原與其McAb的特異性反應設計的。根據(jù)檢查標本的取材及所采用的方法主要分為兩大類：1.體液中的T細胞亞群的分析；2、組織中T細胞亞群的檢測。前者包括血液、胸腹腔積液，腦脊液等；后者包括腫瘤浸潤細胞，移植物侵潤細胞以及炎癥浸潤細胞等。
(一)、體液中T細胞亞群的檢測方法
一般情況下，體液需要Ficoll-Hypaqu分離富含淋巴細胞的單個核細胞（MNC），然后根據(jù)條件選擇適宜的免疫學方法檢測。
1、酶免疫染色技術(shù)：常規(guī)分離MNC，調(diào)整細胞濃度為1×105~106個/ml，取細胞用不同亞群的McAb(一抗)和酶標抗體（二抗）或與酶抗體復合鏈接物，在相應底物作用下顯色，普通光鏡計數(shù)陽性細胞，計算出各亞群的百分比。
2、流式細胞儀：機體免疫狀態(tài)是衡量機體是否患病的重要指標，目前多采用流式細胞術(shù)檢監(jiān)測機體的免疫狀態(tài)，其中最重要的指標是檢測T、B和NK淋巴細胞的水平。T細胞主要包括T輔助細胞（Th）和T抑制細胞（Ts）細胞亞群。CD3+細胞代表外周血中總的成熟T細胞，理論上應約等CD4+細胞和CD8+細胞的總和，但往往出現(xiàn)CD4+加CD8+細胞之和大于CD3+，這是因為CD4+細胞包括CD3+/CD4+細胞（真正Th細胞）和CD3-CD4+細胞（非Ts細胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+CD56+細胞（一部分NK細胞）和CD3-CD8+CD16+CD56-(未知細胞)。由此可見，真正的TH細胞是CD3+CD4細胞，真正Ts細胞是CD3+CD8+細胞。尤其當患者NK細胞明顯增加時，會使CD4細胞和CD8細胞的總和大于CD3+細胞，因此，用三色熒光標記才能分析真正的輔助性T細胞和抑制性T細胞。
3、免疫熒光染色法：MNC懸液的濃度調(diào)整至1×107個/ml，可用細胞懸液與抗壓群McAb在小試管內(nèi)是反應，也可將細胞懸液涂片，然后同酶免疫染色操作。根據(jù)條件可選擇直接法和間接法。T細胞表面抗原直接或間接與熒光抗體結(jié)合，通過熒光顯微鏡或流式細胞儀（FCM）計數(shù)。
4、補體殺傷試驗：將淋巴細胞同其McAb(應是細胞毒抗體)作用，加入兔或豚鼠血清（預先選擇對淋巴細胞無毒性）提供補體?？乖贵w結(jié)合，在補體參與下,T細胞膜受損，通透性增加，然后用活細胞或死細胞染色法染色，光鏡計數(shù)死細胞百分比，以確定相應T淋巴細胞亞群比例。
5、花環(huán)形成試驗：常用的有紅細胞花環(huán)和細菌花環(huán)，通過抗T細胞McAb與T細胞表面抗原結(jié)合形成可觀察的花環(huán)。
(1）直接紅細胞花環(huán)試驗：經(jīng)醛化的紅細胞與T細胞McAb連接成指示劑。當淋巴細胞周圍結(jié)合4個以上紅細胞者為陽性細胞。
(2)間接紅細胞花環(huán)試驗：以結(jié)合了抗鼠IgG的醛化紅細胞為指示細胞，淋巴細胞借T細胞McAb同指示細胞結(jié)合形成花環(huán)，光鏡計數(shù)，結(jié)合3個以上紅細胞者為陽性細胞。
(3）SPA菌花環(huán)試驗，以葡萄球菌為指示劑。SPA同抗T細胞McAb或抗鼠IgG結(jié)合，然后直接或者間接與淋巴細胞形成花環(huán)，染色后油鏡下觀察。凡周圍連接10個以上葡萄球菌的淋巴細胞為陽性細胞。
（二）、組織中T細胞亞群的檢測：
由于淋巴細胞表面抗原比較脆弱，組織切片不宜常規(guī)制片，而需采用冰凍切片。常用的方法有酶免疫組織化學方法和免疫熒光技術(shù)。如需對T細胞進行定位，可選擇分離的淋巴細胞進行分析。
三、T細胞亞群檢測的臨床意義：
體液中T細胞亞群的分析和組織內(nèi)的定位檢測作為判斷細胞免疫功能的一項重要指標，對惡性腫瘤，自身免疫性疾病，血液系統(tǒng)疾病，同種組織器官移植，以及各種傳染病的診斷，發(fā)病機理的研究，指導免疫治療和判斷預后等方面平均具有重要意義。外周血T細胞亞群CD3+、CD4+和CD8+的改變常見的有：
（一）、CD3+細胞數(shù)的改變，表示T淋巴細胞總數(shù)在外周血MNC中的比例的變化。
1、下降常見于：某些白血病，應用免疫抑制劑，化療或放療過程中，長期接受放射性物質(zhì)，先天性細胞免疫缺陷者，艾滋病，多發(fā)性骨髓瘤，傳染性單核細胞增多癥，某些病毒感染性疾病。
2、增高可見于：重癥肌無力，某些自身免疫性疾病，慢性活動性肝炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等。
（二）、CD4+/CD8+細胞比值改變：表明機體細胞免疫功能紊亂。不管是CD4+或CD8+細胞數(shù)發(fā)生變化均影響該比值。
1、下降是由于CD4+細胞減少或CD8+細胞增多。常見于再生障礙性貧血，某些白血病，骨髓移植后，急性乙型肝炎及無癥狀攜帶者，傳染性單核細胞增多癥，免疫缺陷綜合癥，艾滋病，某些病毒感染，惡性腫瘤，結(jié)核病，同種器官移植排斥階段等。
2、升高常由于CD4+細胞增多或CD8+細胞減少所致?？梢娪谀承┳陨砻庖咝约膊。到y(tǒng)性紅斑狼瘡。
四、評價及發(fā)展前景：
根據(jù)T細胞表面標志，檢測T細胞亞群是目前觀察機體細胞免疫水平的重要方法之一。但由于T細胞亞群的復雜性，表面標志和功能之間的相對性，以及檢測方法的多樣性等，所以只根據(jù)外周血CD3+，CD4+和CD8+細胞亞群的水平判斷機體細胞免疫功能有一定局限性，需要結(jié)合具體疾病和病情程度進行綜合分析，近年來新的抗T細胞亞群McAb及新型McAb的問世，為T細胞亞群檢測的進一步發(fā)展提供了可能。鑒于目前的研究狀況和存在的問題，T細胞亞群的檢測可從以下幾方面改進和發(fā)展：1、應用多種McAb做雙標記或多標記檢測，也可用雙特異性McAb染色，對T細胞進一步分群。2、改進檢測技術(shù)，確定標準的檢查方法，建立一定的質(zhì)量控制措施，提高檢測水平；3、結(jié)合細胞因子和組織中T細胞亞群的檢測，綜合判斷機體免疫功能；4、建立檢測特異性T細胞亞群或克隆的方法。
雷德生物免疫細胞
雷德生物主要銷售業(yè)務以免疫細胞為核心的免疫產(chǎn)品系列，圍繞PBMC,CD4+,CD8+,CD14+,CD19+,Treg等免疫細胞亞群產(chǎn)品和技術(shù)服務項目進行市場推廣和營銷網(wǎng)絡建設，重要的客戶群體集中在蛋白抗體藥物研發(fā)企業(yè)和細胞免疫治療企業(yè)及醫(yī)療機構(gòu)，提供以免疫細胞功能分析為基礎特色的科研產(chǎn)品和技術(shù)服務項目，主要包括專用于生物大分子抗體藥物研發(fā)篩選，藥物毒理藥效學分析，高通量免疫性疾病研究的標準化免疫細胞生物樣本庫，細胞治療領域中的細胞功能分析的產(chǎn)品和服務，高通量免疫性疾病研究的標準化免疫細胞生物樣本庫，細胞免疫領域中的細胞功能分析的產(chǎn)品和服務，圍繞世界500強醫(yī)藥研發(fā)中心，國內(nèi)抗體藥物研發(fā)企業(yè)，細胞治療技術(shù)重點實驗室等機構(gòu)形成了較強的品牌影響力。
質(zhì)量控制
PBMC取自血液制品，按照標準操作流程分離制備，保證不同批次間細胞質(zhì)量的穩(wěn)定性。建立了嚴格的細胞鑒定流程，所提供的原代細胞均經(jīng)過細胞類型特異性標記物、細胞形態(tài)學檢測，保證細胞純度＞95%，細胞活性＞90%；每個批次的產(chǎn)品均經(jīng)過微生物、HIV、HBV、HCV、梅毒等檢測。
